|
|
Testování inhibiční aktivity nových protinádorových léčiv vůči vybraným izoformám cytochromu P450
Kroulíková, Pavla ; Červený, Lukáš (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakologie a toxikologie Studentka: Mgr. Pavla Kroulíková Vedoucí: RNDr. Jakub Hofman, Ph.D. Název rigorózní práce: Testování inhibiční aktivity nových protinádorových léčiv vůči vybraným izoformám cytochromu P450 Cytochromy P450 (CYP450) jsou důležité biotransformační enzymy, které ovlivňují farmakokinetické chování řady klinicky užívaných léčiv a jsou příčinou mnoha závažných lékových interakcí. Spekuluje se též o jejich roli v mnohočetné lékové resistenci vzhledem k tomu, že některé izoformy CYP450 jsou schopny deaktivovat cytostatika. Cílem této rigorózní práce bylo in vitro testování inhibice vybraných izoforem (CYP3A4, CYP3A5, CYP1A2, CYP2C8, CYP2D6, CYP2C9, CYP2C19 a CYP2B6) látkami ze skupiny inhibitorů tyrozinkináz (TKi) - alectinibem, brivanibem, osimertinibem a selumetinibem. Testování proběhlo pomocí komerčně dostupných Vividâ CYP450 Screening kitů. Lidské cytochromy P450 jsou v těchto kitech rekombinantně vloženy do hmyzích mikrozomů. Výhoda této metody spočívá v tom, že při experimentu neprobíhají současně reakce katalyzované jinými enzymy. Princip je založen na přeměně fluorogenního substrátu na fluorescentní produkt pomocí CYP450. Inhibici jsme zjišťovali měřením fluorescence v 15. minutě od zahájení reakce. Jako...
|
|
|
Testování inhibiční aktivity nových protinádorových léčiv vůči vybraným izoformám cytochromu P450
Kroulíková, Pavla ; Červený, Lukáš (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakologie a toxikologie Studentka: Mgr. Pavla Kroulíková Vedoucí: RNDr. Jakub Hofman, Ph.D. Název rigorózní práce: Testování inhibiční aktivity nových protinádorových léčiv vůči vybraným izoformám cytochromu P450 Cytochromy P450 (CYP450) jsou důležité biotransformační enzymy, které ovlivňují farmakokinetické chování řady klinicky užívaných léčiv a jsou příčinou mnoha závažných lékových interakcí. Spekuluje se též o jejich roli v mnohočetné lékové resistenci vzhledem k tomu, že některé izoformy CYP450 jsou schopny deaktivovat cytostatika. Cílem této rigorózní práce bylo in vitro testování inhibice vybraných izoforem (CYP3A4, CYP3A5, CYP1A2, CYP2C8, CYP2D6, CYP2C9, CYP2C19 a CYP2B6) látkami ze skupiny inhibitorů tyrozinkináz (TKi) - alectinibem, brivanibem, osimertinibem a selumetinibem. Testování proběhlo pomocí komerčně dostupných Vividâ CYP450 Screening kitů. Lidské cytochromy P450 jsou v těchto kitech rekombinantně vloženy do hmyzích mikrozomů. Výhoda této metody spočívá v tom, že při experimentu neprobíhají současně reakce katalyzované jinými enzymy. Princip je založen na přeměně fluorogenního substrátu na fluorescentní produkt pomocí CYP450. Inhibici jsme zjišťovali měřením fluorescence v 15. minutě od zahájení reakce. Jako...
|
|
|
Studium expresního profilu neuroblastomové buněčné linie UKF-NB-4 rezistentní na ellipticin
Pinkas, Michael ; Poljaková, Jitka (vedoucí práce) ; Hinďoš Hřebačková, Jana (oponent)
Neuroblastom (NB) je maligní embryonální nádor periferního sympatického nervového systému odvozeného od neurální lišty a nejčastější nádor u dětí do jednoho roku života. Pokud je amplifikován protoonkogen MYCN u NB vysokého rizika, současná protinádorová terapie selhává zejména kvůli vzniku rezistence. Ellipticin (ELLI) je potenciální kancerostatikum, jehož cytotoxický účinek je založen především na inhibici topoisomerasy II, interkalaci do struktury dvojšroubovice DNA a tvorbě aduktů s DNA po enzymatické aktivaci cytochromy P450, peroxidasami, sulfotransferasami a N,O- acetyltransferasami. Dlouhodobá kultivace buněčné linie UKF-NB-4 s ellipticinem vedla ke vzniku rezistence, která je multifaktoriální. (i) Ukazuje se, že ELLI není z linie rezistentní na ELLI (UKF-NB-4ELLI ) vylučován jako doxorubicin při vzniku rezistence v UKF-NB-4, ale je transportován z jádra a sekvestrován v intracelulárních kompartmentech. Cytotoxicitu ELLI také snižuje (ii) nízké intracelulární pH v UKF-NB-4ELLI a (iii) snížená exprese topoisomerasy II. (iv) Exprese enzymů aktivujících ELLI zůstala nezměněná na úrovni mRNA detekované metodou "DNA microarray", pomocí qRT-PCR již však byla pozorována zvýšená exprese enzymů aktivujících ELLI cytochromu P450 3A4 a cyklooxygenasy-1. Navíc exprese cytochromu b5 se zvýšila, čímž se...
|
host ::
RSS.